*培養(yǎng)基: 高糖DMEM (GIBCO 12430); 15%胎牛血清(BIOCHROM S0615); 0.1 mmol/L非必需氨基酸(GIBCO 11140-050); 2 mmol/L谷氨酰胺(GIBCO 25030); 0.1 mmol/L β-巰基乙醇(GIBCO 21985); 1 000 U/ml白血病抑制因子(CHEMICON ESG1107)
凍存液: 90%胎牛血清或*培養(yǎng)液; 10%二甲基亞砜(DMSO, Sigma D2650)
一 小鼠胚胎干細(xì)胞復(fù)蘇
1. 操作前把培養(yǎng)液在37 ℃水浴中溫?zé)帷?nbsp;
2. 從液氮中取出一支凍存管的小鼠胚胎干細(xì)胞, 放入37 ℃水浴中晃動, 直到只剩下小冰晶。
3. 吸取凍存管內(nèi)的細(xì)胞懸液加至有少量*培養(yǎng)液的15 ml 離心管中, 1 000 r/min 離心5 min。
4. 吸棄上清液, 加4~6 ml 培養(yǎng)液, 吹打懸浮。
5. 重復(fù)吹打, 制成單細(xì)胞懸液, 盡量避免氣泡。
6. 轉(zhuǎn)移到1個已經(jīng)鋪好飼養(yǎng)層的25 cm2培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
7. 每天換液。
上海晶抗生物工程有限公司
地址:上海市金山工業(yè)區(qū)亭衛(wèi)公路6558號9幢2441室
版權(quán)所有:上海晶抗生物工程有限公司 備案號:滬ICP備16026504號-5 總訪問量:534580 站點地圖 技術(shù)支持:智慧城市網(wǎng) 管理登陸