今天為大家講述晶抗生物牛ELISA試劑盒的基本操作步驟如下
準(zhǔn)備工作:
試劑準(zhǔn)備:從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘左右,讓試劑恢復(fù)到室溫。同時(shí)按照說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備好各種試劑,如洗滌液可能需要進(jìn)行稀釋等。
樣本準(zhǔn)備:采集的牛血清、血漿或其他相關(guān)液體樣本,按照規(guī)定的方法進(jìn)行處理和保存。例如,血清樣本可于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜后于 1000xg 離心 20 分鐘,取上清液用于檢測(cè);血漿樣本可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后 30 分鐘內(nèi)于 2-8℃、1000xg 離心 15 分鐘,取上清液備用。
加樣:
分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(一般有 6 個(gè)濃度梯度)、空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑)、待測(cè)樣品組。為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
加樣操作:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入適量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,空白對(duì)照孔加入等量的蒸餾水或相應(yīng)的空白對(duì)照液,其余微孔中加入處理好的待測(cè)樣本。加樣時(shí)應(yīng)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:
用封板膜封板后,將酶標(biāo)板放入濕盒內(nèi),根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求在特定溫度(通常為 37℃)下恒溫孵育一定的時(shí)間(一般為 1 小時(shí)左右,但不同的試劑盒可能有不同的要求)。在溫育過(guò)程中,要確保溫度的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,避免溫度波動(dòng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。
洗滌:
小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干。每孔加滿洗滌液,靜置 15-30 秒后棄去,如此重復(fù)多次(一般為 5 次),最后用吸水紙拍干。洗滌過(guò)程要充分,以確保去除未結(jié)合的物質(zhì),避免對(duì)后續(xù)的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,但也要注意避免過(guò)度洗滌導(dǎo)致樣本損失。
加酶標(biāo)溶液:
除空白對(duì)照孔外,向標(biāo)準(zhǔn)品組和待測(cè)樣本組的各孔中加入適量的酶標(biāo)溶液。加酶標(biāo)溶液時(shí)要注意操作的準(zhǔn)確性,避免加樣誤差。
再次溫育:同第 3 步的溫育操作,再次進(jìn)行溫育,使酶標(biāo)溶液與樣品充分反應(yīng)。
顯色:
各孔加入顯色劑 A 液,再加入顯色劑 B 液,輕輕震蕩混勻。然后在特定溫度(如 25-37℃)下避光反應(yīng)一定時(shí)間(一般為 10-15 分鐘),此時(shí)孔內(nèi)的顏色會(huì)發(fā)生變化。
終止反應(yīng):
加入終止液,終止反應(yīng)(此時(shí)顏色通常會(huì)由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入量要準(zhǔn)確,并且要迅速、均勻地加入,以確保反應(yīng)能夠及時(shí)終止。
讀板:使用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)(一般為 450nm)下讀取各孔的吸光度(OD 值)。
結(jié)果分析:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)待測(cè)樣品的 OD 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù)(如果在加樣前對(duì)樣品進(jìn)行了稀釋),即為樣品的實(shí)際濃度。
上海晶抗生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的牛ELISA試劑盒科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。
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