晶抗生物人C3SPelisa試劑盒操作步驟介紹如下
操作步驟:
1、使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3、加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37°C溫育30分鐘。
6、甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,
7、每孔加入底物A、B各50u,輕輕振蕩混勻,37℃C溫育5分鐘。避免光照
8、取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,
9、在450nm波長處測定各孔的OD值。
操作注意事項:
1、試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存
2、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6、底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,
7、加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。一般來講,96T能檢測90個樣本,48T能檢測42個樣本,這里面需要用標(biāo)樣來做標(biāo)準(zhǔn)曲線,所以各位需要做實驗的老師們,請在購買ELISA試劑盒的時候注意,需要做多少個樣本,在決定買多大規(guī)格的試劑盒,以免做實驗時出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費!
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