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ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫剖析技能。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的規(guī)范程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體（capture Ab）固定在固相載體上，再參加一級檢測抗體（primarydetection Ab），形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。假如該抗體現(xiàn)已用酶（enzyme）符號了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可使用另一個(gè)酶符號的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的辦法是參加該酶的底質(zhì)（substrate），作用后發(fā)作呈現(xiàn)的色彩深淺和樣本中的抗原量呈正比的，依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。

信任經(jīng)常用elisa試劑盒做實(shí)驗(yàn)的科研朋友都知道，有四種常用的辦法來檢測，分別是直接法、間接法、雙抗體夾心法和競賽法及*新ELISA技能--依據(jù)細(xì)胞法。今天上海基免就帶您了解它們的優(yōu)缺陷！
1.雙抗體夾心法（sandwich ELISA）
被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間，其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體，此抗體可用酶符號后直接測定抗原的量；或不符號，再透過酶符號的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選取，才可防止交互反響或競賽相同的抗原結(jié)合部位。
優(yōu)勢：高靈敏、高專一性，抗原無須事前純化。
缺陷：抗原必定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。
2.競賽法（competitive ELISA）
樣本里的抗原（自在抗原）和純化并固定在固相載體上的抗原（固定抗原）一起競賽相同的抗體，當(dāng)樣品里的自在抗原越多，就能夠結(jié)合越多的抗體，而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體，反之亦然。經(jīng)清洗過程，洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物，只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物，拿來與只要固定抗原的對照組成果相比較，依據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
優(yōu)勢：可適用比較不純的樣本，并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺陷：整體的敏感性和專一性都較差。
3.新ELISA技能--依據(jù)細(xì)胞法（cell-based ELISA）
依據(jù)細(xì)胞法是一種新的定性蛋白檢測技能，將細(xì)胞直接在微孔板里培育，待檢測時(shí)，不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞，便可直接丈量微孔板里蛋白經(jīng)影響或抑制作用后的改變。
優(yōu)勢：無需裂解細(xì)胞，所以方針蛋白丟失*少，可測定完好細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。
缺陷：不能測定抗原量。
4.直接法（direct ELISA）
將抗原直接固定在固相載體上，參加酶符號的一級抗體，即可測定抗原總量，此一級抗體的特異性非常重要。
優(yōu)勢：操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可防止交互反響。
缺陷：實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號，但不是每種抗體都適合做符號，費(fèi)用相對提高。
5.間接法（indirect ELISA）
此測定辦法與直接法相似，不同在于一級抗體沒有酶符號，改用酶符號的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。
優(yōu)勢：二抗能夠加強(qiáng)信號，并且有多種挑選能做不同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保存它*多的免疫反響性。
缺陷：交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。