更新時間:2024-06-10
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HCECs人角膜上皮細胞包郵細胞庫管理規(guī)范提供上萬種,原代細胞、ATCC細胞細胞系、細胞珠、細胞、細胞貼壁細胞、懸浮細胞等提供參考文獻和優(yōu)培養(yǎng)條件,為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動的時間和精力,我們有過硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù),為您解決后顧之憂。
細胞復(fù)蘇
& 把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
& 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
& 把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。
& 標(biāo)好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。
& 3天換一次培養(yǎng)基。
細胞培養(yǎng)過程中,從實驗室的設(shè)計到實驗過程中的操作,都需要嚴格控制無菌。由于細胞對于生長的條件比較苛刻,所以無論從實驗室的設(shè)計,還是使用的物品及細胞培養(yǎng)的操作過程,都要注意保持無菌環(huán)境。
傳代方法:細胞*匯合時,倒掉舊液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,顯微鏡下觀察細胞*脫離瓶壁分離成單個細胞后棄掉胰酶,加培養(yǎng)基混勻分瓶,T25瓶中加培養(yǎng)基至6-8ml,T75瓶加培養(yǎng)基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培養(yǎng)。
培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究zui常用的手段之一,可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取細胞進行培養(yǎng)。由于細胞剛剛從活體組織分離出來,故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段,同時也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。利用此方法還可直接服務(wù)于臨床實踐。
上海晶抗生物
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實驗無菌技術(shù):
& 實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面,并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實驗操作。
& 每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢
& 將實驗物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作臺面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后,再進行下一個細胞株的操作。
& 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管、吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。
& 實驗用品以70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在臺面的中央無菌區(qū)域,勿在邊緣的非無菌區(qū)域操作。
& 小心取用無菌的實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口,亦不要在打開的容器正上方操作實驗。
& 容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
& 工作人員應(yīng)注意自身的安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。
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